奥豪斯电子天平、移液器在朝医方千金文武汤提取中的应用-上海香川电子衡器有限公司
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    奥豪斯电子天平、移液器在朝医方千金文武汤提取中的应用


    目前临床使用朝医经典方剂千金文武汤(《东医四象新编》)用于治疗糖尿病具有显著疗效。本文以该方剂药味中共有活性部位总黄酮的提取量为指标,优选最佳提取工艺。
      仪器与试药
      756PC型紫外可见分光光度计(上海恒平);DV114C型电子天平(奥豪斯仪器上海有限公司);芦丁(购自中国药品生物制品检验所,批号:818-9401);药材为:葛根、黄芩、山药、麦门冬、五味子、桔梗、白芷;水为纯水,其他试剂均为分析纯。
      方法与结果
      1.处方分析:千金文武汤处方由葛根、山药、黄芩、麦门冬、五味子、桔梗、白芷七味药组成,具有补肺敛肺、润燥化痰、生津解表的功效,主要用于太阴人下消,小便不禁等证,目前朝医临床常用其治疗DM。方中主药葛根中黄酮类成分葛根素、黄芩中黄酮类成分黄芩苷有明确
    降血糖或降血脂作用。故以葛根、黄芩为主,结合其他药味,选择总黄酮为该方剂提取的指标成分。总黄酮含量测定方法学考察:采用紫外分光光度法,建立总黄酮含量的测定方法。
      2.溶液的配制。
      对照品溶液:用奥豪斯电子天平精密称取干燥至恒重的芦丁5.7mg,用适量水溶解后定容至100ml,即得。样品溶液:奥豪斯电子天平称取处方量药材,加入12倍量水浸泡1h,加热煎煮提取1h,滤过,再加入10倍量水提取1h,滤过,合并滤液,定容至1 200ml,即得。供试品溶液:在用奥豪斯移液器精密吸取样品溶液1ml于蒸发皿中,加1g聚酰胺粉吸附,于恒重干燥箱中,50℃挥干溶剂,转入层析柱,用30ml石油醚洗脱,弃石油醚,再用30ml甲醇洗脱总黄酮,收集洗脱液,减压蒸干,残渣用甲醇溶液溶解并定容至25ml即得。
      3.线性关系的考察:奥豪斯移液器精密量取对照品溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml至10ml容量瓶中,用水定容,在256nm处测定吸光度。以吸光度值(Y)对浓度(X)进行回归,得到其回归方程。结果表明,对照品溶液浓度与吸光度值呈良好的线性关系。
      4.精密度考察:用奥豪斯移液器精密量取上述对照品溶液,重复测定5次,RSD为0.77%,表明仪器精密度良好。
      5.稳定性考察:用奥豪斯移液器精密量取同一供试品溶液,分别于0、2、4、8、12、24h进行测定,RSD为0.91%,表明供试品溶液在24h内稳定。
      6.重现性考察:用奥豪斯电子天平精密称取同一批样品溶液5份,按供试品溶液项下制备,按上述方法测定,RSD 为0.95%,表明本法重现性良好。
      7.加样回收率考察:用奥豪斯移液器精密量取已知含量的样品溶液共6份,分别精密加入对照品适量,按供试品溶液项下制备,测定,计算回收率。本法平均回收率为97.77%,RSD为1.54 %,表明本法准确度较好,方法可行。
      8.样品浓度与吸光度线性关系考察:精密量取1ml样品溶液,用蒸馏水定容至50ml,分别精吸1、2、3、4、5ml置10ml容量瓶中,用蒸馏水定容,在256nm处测吸光度值。以吸光度值(Y)对浓度(X)进行回归,得其回归方程。结果表明,样品浓度与吸光度值呈良好的线性关系,表明以总黄酮含量作为样品测定指标合理、可行。
      提取工艺优化
      1.试验方案的设计:采用正交设计试验,以样品中总黄酮含量为评价指标,优选最佳提取工艺。复方制剂实际生产中提取次数一般为2次,所以在提取工艺中,提取时间、溶剂用量是影响总黄酮提取量的主要因素。因此,选用L4(22)正交设计安排实验。结果分析:以各实验组总黄酮的含量为指标进行分析。结果表明,在所选因素的水平范围内,因素A(提取时间)、B(溶剂用量)对总黄酮提取量均无显著性影响。通过正交试验所得结果进行直观选择,最佳提取工艺为A2B1,即提取时间为90min/45min,溶剂用量为12倍/10倍。
      2.验证性实验:按照上述优化提取工艺进行提取,重复进行3次平行试验,测得样品中总黄酮含量为(3.532



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